人葡萄球菌蛋白A（SPA）ELISA试剂盒实验操作步骤-
来源：
作者：华仔
浏览：267
时间：2017-10-21 17:12
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摘要：很多研究生在订购elisa试剂盒的时候，会问到有关试剂盒的实验步骤等问题， 就在刚才，我司钱经理接到钟老师的来电，她说想咨询下人葡萄球菌蛋白A（SPA）ELISA试剂盒，不知道这试剂盒实验步骤是怎样操作的，能否发份说明书给我看下吗，我司钱经理把说明书发他看下。2015/03/31 09:38:55对方已成功接收了您发送的离线文件“人葡萄球菌蛋白A（SPA）说明书.pdf”（
很多研究生在订购elisa试剂盒的时候，会问到有关试剂盒的实验步骤等问题， 就在刚才，我司钱经理接到钟老师的来电，她说想咨询下人葡萄球菌蛋白A（SPA）ELISA试剂盒，不知道这试剂盒实验步骤是怎样操作的，能否发份说明书给我看下吗，我司钱经理把说明书发他看下。
2015/03/31 09:38:55对方已成功接收了您发送的离线文件“人葡萄球菌蛋白A（SPA）说明书.pdf”（148.91KB）。
下面是我司钱经理为客户整理的一份人葡萄球菌蛋白A（SPA）ELISA试剂盒实验操作步骤：
人葡萄球菌蛋白A（SPA）ELISA试剂盒实验材料与试剂配制：
1.仪器与材料：酶标仪（使用前预热30分钟），微量加液器、吸头、蒸馏水或去离子水，滤纸。
2. 洗液的配制：按1:30的比例配制洗液备用。
人葡萄球菌蛋白A（SPA）ELISA试剂盒操作步骤：
1）取出试剂盒，室温（20-25℃）放置30分钟。
2）分组：取出96孔板，根据待测样品数量加上标准品的数量决定所需的板条数，把剩余的板条继续冷藏处理。分别设标准品组（6个浓度）、空白孔、待测样品组。
3）标准品的稀释：准备小试管6 只，依次编好号码，先在各小试管中加入标准品稀释液100ul，然后取原浓度标准品100ul加入一只已编好号的试管中，充分混匀;再在该试管中取100ul 加入第二支试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第三只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul 加入第四只试管中，充分混匀；再在该试管中取100ul加入第五只试管中，充分混匀；然后在该试管中取100ul，弃掉。第六只试管作为0 号标准品。
注：为减少实验误差，保证准确性，建议设置复孔。
4）加样：依照标准品的顺序分别加入50ul的标准品溶液于空白微孔中；空白对照孔加入50ul的蒸馏水；其余微孔中先加样品40ul然后再加生物素标记的抗体10ul。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
5）温育：用封板膜封板后置37℃温育30 分钟。
6）洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30 秒弃去，如此重复5 次，拍干。
7）加酶标溶液：标准品组、待测样本组各孔中加入50ul的酶标溶液（空白对照孔除外）。
8）温育：酶标板用封板纸密封后，放入湿盒内于37℃恒温孵育1小时。
9）洗板：用稀释后的洗涤液注满每孔，静置15-30s，充分清洗酶标板5次，用吸水纸彻底拍干。
10）显色：各孔加入显色剂A液50ul后，再加入显色剂B液50ul。
11）终止：25-37℃下避光反应10-15分钟，加入50ul终止液。
12）读板：在450nm波长读取各孔的OD值。
注：读板时必须拭干板底残留的液体和手指痕迹，读板时间控制在终止反应后的30分钟内，以免影响准确性。
